Emergence de Streptococcus pneumoniae résistant à la rifampicine à la suite d’un traitement antimicrobien contre des souches résistantes à la pénicilline

Emergence de Streptococcus pneumoniae résistant à la rifampicine à la suite d’un traitement antimicrobien contre des souches résistantes à la pénicilline

Une souche multirésistante de Streptococcus pneumoniae a été isolée aux Pays-Bas lors d’une éclosion nosocomiale chez des patients atteints de bronchopneumopathie chronique obstructive. Après le début de l’allaitement et de l’éradication à court terme de la ceftriaxone-rifampicine, l’éradication a échoué. chez les patients, et l’étude de suivi de ces patients a montré l’émergence d’isolats résistants à la rifampicine

En raison des taux élevés de sécrétions respiratoires, des écouvillonnages nasopharyngés ont été effectués au moins une fois au cours de l’année. Trois patients n’ont pas répondu au traitement, comme décrit ci-dessus. Microbiologie Les profils ADN des isolats ont été analysés par ordinateur. après avoir été confirmé comme S pneumoniae A -bp région interne du gène rpoB a été amplifié par PCR avec des amorces RpoBfw ‘-GTACGTTTGGGACTTTCTCG-‘, la position des nucléotides – et RpoBrev ‘-CATGCTGTTCGCAACGGCAAC-‘, la position des nucléotides – Positionnement des amorces est basé sur la séquence du gène rpoB de la base de données du génome S pneumoniae de l’Institut de Recherche Génomique. L’amplification TIGR a été réalisée dans des volumes -mL contenant du Tris-HCl mM pH, du NHSO mM, du Tween% w / v, du MgCl mM, des désoxynucléoside triphosphates mM, pM des amorces individuelles, l’ADN polymérase Goldstar de l’U de Taq, Eurogentec, et ng d’ADN chromosomique purifié ont été réalisées dans un PTC programmable. rmal Controller MJ Research et comprenait les étapes suivantes: prédénaturation à ° C pendant min; cycles de min à ° C, min à ° C et min à ° C; et une extension finale à ° C pendant min Avant l’analyse des séquences nucléotidiques, les amplicons -bp ont été purifiés par précipitation à l’acétate de sodium. Chaque amplicon a été séquencé en utilisant pM des amorces suivantes: RpoBfw, RpoBrev ‘-TTGTTCAAGTGTCCATAAG-‘, position -, RpoBfw ‘ -ACTCACTATGGTCGTTATGTG-, et des réactions de séquençage d’ADN RpoBrev ont été réalisées avec -ng d’ADN avec le kit de prémélange de séquençage par cycle de terminaison de colorant Thermo Sequenase Pharmacia Amersham La procédure de séquençage d’ADN a été réalisée selon les recommandations du fabricant. Biosystems Prism Pharmacia Amersham Des expériences de transformation ont été réalisées avec des cellules S pneumoniae Rx, comme décrit par Lacks Les cellules ont été incubées pour h à ° C avec mg d’ADN amplifié rpoB bp d’isolats pneumococciques résistants à la rifampicine et ng de facteur de stimulation synthétique de compétence CSP- ; aimablement fourni par D Morrisson avant étalement sur plaques d’agar Todd-Hewitt Difco contenant% d’extrait de levure Difco et g / L rifampicine Yamanouchi Pharma La sensibilité des transformants pneumococciques pour la rifampicine a été déterminée par la méthode de dilution en gélose selon les directives du Comité national pour Patient admis Le patient a été admis dans le service pulmonaire en novembre pour exacerbation de la MPOC Le dépistage avait révélé des souches MDR sensibles à la rifampine de S pneumoniae, dont la première a été isolée en mars. Ce patient a reçu un traitement antibiotique suivi d’administrations de rifampicine. En décembre, une souche MDR de S pneumoniae présentant une résistance à la rifampicine MIC, mg / L, a été isolée du nasopharynx de ce patient. En dépit de la protocole, l’amoxicilline et la rifamycine ont été administrées en duothérapie, la rifampicine isolats résistants ont été collectés à différentes occasionsPatient Patient w Elle a reçu un traitement à la pénicilline, suivi du cotrimoxazole et de la rifampicine pendant plusieurs jours. Au cours du suivi à la clinique externe en octobre, un isolat pneumococcique MDR a été administré à l’hôpital en septembre avec une exacerbation de la MPOC et un eczéma constitutionnel. résistance supplémentaire pour la rifampicine MIC, & gt; Un nouveau traitement d’éradication de la rifampicine pendant plusieurs jours a été prescrit en monothérapie. En décembre, une souche résistante à la rifampine de la multirésistance à la rifampicine a été détectée. Une dose accrue de pénicilline et de ceftriaxone iv a été prescrite. résultant en l’éradication de la souche résistante à la rifampicine en janvier Patient Patient présentant une déshydratation et une obstipation Le dépistage microbiologique a révélé une souche MDR, mais sensible à la rifampicine, de S pneumoniae en avril et en septembre, sans signes d’exacerbation de la MPOC. Rifampin en monothérapie a été prescrit dans une tentative d’éradiquer le pneumocoque Un échantillon ultérieur en Novembre était négatif pour S pneumoniae En Mars, un CIF résistant à la rifampine, mg / L souche MDR de S pneumoniae, également très résistant pour la tétracycline MIC, & gt; mg / L, émergé dans l’expectoration du patient En avril, le patient a été réadmis pour une exacerbation de la MPOC Un traitement antibiotique a été administré sans second traitement d’éradication Après la sortie de l’hôpital en mai, le pneumocoque MDR a été isolé à plusieurs reprises cette année. Une analyse microbiologique a montré que tous les isolats résistants à la rifampicine appartenaient au génotype chromosomique type RFEL et au sérogroupe. Le génotype de résistance à la pénicilline était PBP. type – Ces résultats correspondent aux observations faites lors de l’éclosion initiale , ce qui implique une résistance primaire de ces isolats de S pneumoniae

Figure Vue largeTélécharger la séquence d’acides aminés de Streptococcus pneumoniae RpoB de la souche Rx résistante à la rifampicine et des souches isolées des patients, et avant et après la thérapie d’éradication B Les résidus d’acides aminés sont numérotés en fonction de leur position dans la protéine RpoB indique la partie du gène PCR-amplifié et PCR-Rifampin MIC valeurs des souches sont également représentésFigure View largeTélécharger diapositive Séquence d’acides aminés de Streptococcus pneumoniae RpoB de la souche Rx sensible à la rifampicine et les souches isolées des patients,, et avant A et après Thérapie d’éradication Les résidus d’acides aminés sont numérotés en fonction de leur position dans la protéine RpoB La barre rayée indique la partie du gène amplifiée par PCR et séquencée par PCR Les valeurs de Rifampin MIC des souches sont également représentées Les mutations dans rpoB montrent un changement de position de l’histidine à l’asparagine chez le patient et chez le patient, de l’histidine à l’acide aspartique Les parties géniques amplifiées dérivées des isolats résistants à la rifampicine ont été utilisées pour transformer la résistance à la rifampicine conférée par le transfert Rx de la souche pneumococcique sensible à la rifampine dans les transformants Rx. Niveaux de CMI égaux aux données sur les souches donneuses non montrées Ces observations indiquent que les mutations ponctuelles des gènes rpoB des isolats de MPOC étaient responsables du phénotype résistant à la rifampicine. La MPOC est une maladie associée à des exacerbations fréquentes, souvent accompagnées d’infections causées par Haemophilus influenzae ou S pneumoniae En conséquence, l’antibiothérapie est largement utilisée dans le traitement des exacerbations de la BPCO L’utilisation des antimicrobiens est généralement considérée comme le moteur de la résistance bactérienne, entraînant le retour des bactéries MDR dans cet antibiotique. niche « Par conséquent, la prévalence des infections à MDR st La combinaison de soins de barrière, d’un traitement antibiotique β-lactame et d’une thérapie d’éradication de la rifampine dans le protocole de traitement de Veldhoven était évidemment efficace. Cependant, le pneumocoque MDR n’a pas pu être éradiqué chez les patients. Analyse microbiologique Les mutations sont survenues dans différentes régions du gène rpoB et ont montré des substitutions d’acides aminés distinctes. Nous concluons qu’une thérapie inadéquate causée par une prescription inexacte a entraîné une rifampicine médiée par rpoB primaire. Résistance à l’occasion Évidemment, l’utilisation de la rifampicine en monothérapie chez les patients a contribué à l’acquisition de la résistance à la rifampicine, et ces patients n’ont pas répondu au traitement La résistance primaire du patient a été démontrée. a contribué Cette étude indique l’importance d’un suivi bactériologique précis des patients atteints de BPCO colonisés ou infectés par des pneumocoques MDR et suggère l’extension du schéma d’éradication actuel avec un antibiotique β-lactame supplémentaire